Однако в 18 веке и в первой половине 19 века этот богатый край оставался необжитым. Освоение приамурских земель началось лишь в 1854 году. Большую роль в этом сыграла деятельность генерал-губернатора Восточной Сибири Н.Н. Муравьева, удостоенного за заслуги перед Отечеством графского титула с приставкой "Амурский". В 1854 г. он организовал первый военный сплав в низовья Амура для отражения натиска англо-французских завоевателей. В сплавах участвовали регулярные войска, казаки и переселенцы, которые оседали вначале в низовьях реки, а затем расселялись вглубь дальневосточной территории. Особое место среди них занимали забайкальские казаки. На плотах и баржах их доставляли по рекам Амуру и Уссури и расселяли партиями на расстоянии 20-30 верст друг от друга для образования непрерывной линии пограничных кордонов, почтовых и пароходных станций. 
В ходе третьего сплава в 1856 г. подполковником Н.В. Буссе, начальником сплава, было поставлено 4 поста, в т.ч. на территории будущей автономии – пост Хинганский при входе в Малый Хинган из 24 человек. По предложению генерал-губернатора Восточной Сибири Н.Н. Муравьева в 1856 г. была создана так называемая "Амурская линия", которая располагалась по левому берегу Амура, предназначенная для заселения казаками Забайкальского войска. В 1857 г. на левобережную территорию Амура было сплавлено 583 семьи забайкальских казаков, которые основали первые 16 поселений, из них на территории будущей области было основано село Пашково (бывш. пост Хинганский). С образованием Забайкальской, Амурской и Приморской областей "Амурская линия" была упразднена. Заселение береговой полосы р. Амур казаками до 1862 г. носило принудительный характер. 
Из документа "Материал по исследованию естественно-исторических условий Биробиджана" узнаем: " … Еще весной 1856 г. все селения 2-й конной Забайкальской бригады облетела весть о вызове охотников идти переселенцами на Амур. 
Но таковых не нашлось и пришло распоряжение о наборе переселенцев посредством жребия и назначения по усмотрению начальства … 
В объявлении о наборе значилось: переселяющимся будут отведены места самые удобные для ведения хлебопашества, имеющие хорошие пастбища для лошадей и домашнего скота, воду и лес в достаточном количестве; переселяющиеся пользуются двухлетнею льготою от службы; они получают 15 руб. пособия и в течение двух лет провиантское довольствие, а бедные, кроме того, - бесплатное обмундирование и прочее … 
Но все эти обещания нисколько не прельщали казаков, живших сравнительно в довольстве и не нуждающихся в перемене места, и всякий из них, вынувший билетик с роковой надписью "в Амур", носил вид приговоренного точно к смерти… 
Само расселение по обозначенным местам не зависело от казаков. Их не спрашивали, нравится ли место, годно ли оно к землепашеству… 
Старший на барже, завидев столб с дощечкой, командовал: "Прибиваться к берегу" - и, выгрузив людей, имущество, провиант, плыл дальше для той же надобности… ". 
Казаки, высаженные на берег с провиантом на год, не получали помощи, поэтому первые годы поселения приносили им ряд бедствий и лишений. 
В 1858 г. Айгуньский, а в 1860 г. Пекинский договоры официально закрепили пограничную линию между Россией и Китаем, приамурская территория, открытая и освоенная русскими людьми в XVII – XIX вв., стала составной частью России и получила административное наименование "Приамурский край". Будущая территория ЕАО входила в состав края. 
Указом императора России от 29 октября 1858 г. было создано Амурское казачье войско, которое состояло из 2-х Амурских конных казачьих полков и Амурского пешего казачьего батальона. 
В 60-е годы ХIХ в. продолжалось заселение русскими людьми приамурских земель. В результате 6-летнего переселения (1856 – 1862 гг.) на территории будущей области были образованы поселения: Венцелево, Воскресеновка, Верхне-Спасское, Головино, Дежнево, Доброе, Екатерино-Никольское, Забеловское, Квашнино, Кукелево, Луговое, Михайло-Семеновское, Нижне-Спасское, Нагибово, Пузино, Петровское, Радде, Союзное, Степановка и другие. Все они входили в состав Амурского пешего казачьего батальона. К 1893 г. в Амурском пешем казачьем батальоне значились три станичных округа: Екатерино-Никольский, Михайло-Семеновский, Раддевский.